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标题:
牛乳检验方法
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作者:
safety
时间:
2007-7-31 22:15
标题:
牛乳检验方法
本标准适用于生鲜牛乳的检验。
1 取样规则
1.1 每次取样量最少为250ml。 取样时要将牛乳混合均匀。取混合样品时，可采取在同一个样品瓶中混匀即可。在 贮乳缸取样应开动搅拌器。一般取样量为0.2～1‰。 牛乳样品应贮于2～6℃，以防变质。
1.2 检验样品的准备 样品应置于15～20℃水中，保温10～15min，然后充分摇匀。冰冻应预先加温熔化， 升温到20℃时充分摇匀后再取样。
1.3 检验程序
1.3.1 验收牛乳时，应先做感官鉴定，是否有异常气味，如酸味、牛粪味、腥味 和煮熟乳气味等。 a 色泽是否带红色、绿色或明显的黄色； b 是否有大量杂质，如煤屑、豆渣、牛粪、尘埃和昆虫等； c 牛乳是否发粘或呈凝块。
1.3.2 测定比重和脂肪，按公式求出牛乳的近似成分，或测定其干物质。
1.3.3 测定酸度。
1.3.4 当有疑问时，按具体情况检查有无防腐剂、掺杂物和病牛乳等。
1.4 各项简单的试验与检验，均于验收牛乳时进行，并作出牛乳等级的决定。如 有疑问或争执时，其正式鉴定应由工厂化验室检验科按的采样品进行检验。
2 牛乳检验方法
2.1 牛乳新鲜度试验
2.1.1 滴定酸度：吸取10ml牛乳，置于250ml三角瓶中，加入20ml水，再加入 0.5ml 0.5%的酚酞乙醇溶液，小心摇匀，用0.1N氢氧化钠标准溶液滴至微红色（见 注），在1min内不消失为止。消耗0.1N氢氧化钠标准溶液的毫升数乘以10，即得 酸度(°T)。 注：滴定酸度终点判定标准颜色的制备方法下。 取滴定酸度测定的同批和同样数量的样品如牛乳10ml，置于250ml三角瓶中，加入 20ml蒸馏水，再加入3滴0.005%碱性品红溶液，摇匀后作为该样品滴定酸度终点判 定的标准颜色。 其他产品酸度滴定的标准颜色的制备，可根据其标准滴定酸度测定的取样量和加水 稀释量的总容积，参照本方法按比例增加或减少0.005%碱性品红滴数即可。
2.1.2 酒精试验：于试管内用等量的乙醇（中性）与牛乳混合（一般用1～2ml等 量混合），振摇后不出现絮片的牛乳符合表1酸度标准，出现絮片的牛乳为酒精试 验阳性乳，表示其酸度较高。 试验温度以20℃为标准，不同温度需进行校正。根据收乳标准，采用68°、70°和 72°的酒精。
表1 ┌────┬────────┐
│酒精浓度│不出现絮片的磁度│
├────┼────────│
│ 72° │ 20T以下 │
├────┼────────│
│ 70° │ 19T以下 │
├────┼────────│
│ 68° │ 18T以下 │
└────┴────────┘
2.1.3 煮沸试验：取约10ml牛乳，放入试管中，置于沸水中5min，姆出观察管壁有 无絮片出现或发生凝固现象。如产生絮片或了生凝固，表示牛乳已不新鲜，酸度 大于26°T。
2.2 牛乳比重测定 本标准规定牛乳比重为20℃的牛乳与同体积4℃的重量比值。
2.2.1 仪器
2.2.1.1 乳稠计：牛乳比重用乳稠计测定，乳稠计有20℃/4℃和15℃/15℃两种。
a 2°=b (1)
式中：a-20℃/4℃测得的度数；
b-15℃/15℃测得的度数。
2.2.1.2 玻璃圆筒（或200～250ml量筒）：圆筒高应大于乳稠计的长度，其直径 大小应使乳稠计沉入后，玻璃圆筒（或量筒）内壁与乳稠计的周边距离不小于5mm。
2.2.2 方法 将10～25℃的牛乳样品小心地注入容积为250ml的量筒中，加到量筒容积的3/4，勿 使发生泡沫。用手拿住乳稠计上部，小心地将它沉入到相当标尺30°处，放手让它 在乳中自由浮动，但不能与筒壁接触。待静止1～2min后，读取乳稠计度数，以牛 乳表面层与乳稠计的接触点，即新月形表面的顶点为准。 根据牛乳温度和乳稠计度数，查牛乳温度换算表（见表2），将乳稠计度数换算成 20℃或是5℃时的度数。 比重(γ204）与乳稠计度数的关系如式(2)。
乳稠计度数＝(γ204-1.00)×1000 (2)
2.2.3 计算举例 牛乳试样温度为16℃，和20℃/4℃的乳稠计测得比重为1.0305,即乳稠计读数为 30.5°。换算成温度20℃时乳稠计度数，查表2,同16℃、30.5°对应的乳稠计度数为 29.5°，即20℃时的牛乳比重为1.0295。 如若计算全乳固体，则可称算成15℃/15℃的乳稠计度数。这可直接从20℃/4℃的 乳稠计读数29.5°加2°求得，即29.5° 2°=31.5°。 表2
┌─────┬───────────────────────────────────────────────┐
│乳绸计读数│ 牛乳温度，℃ │
│ ├──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┤
│ │10 │11 │12 │13 │14 │15 │16 │17 │18 │19 │20 │21 │22 │23 │ 24 │25 │
│ ├──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┤
│ │换算为20℃时牛乳乳稠计度数 │
├─────┼──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┤
│25 │23.3│23.5│23.6│23.7│23.9│24.0│24.2│24.4│24.6│24.8│25.0│25.2│25.4│25.6 │25.8│26.0│
├─────┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
│ 25.5 │23.7│23.9│24.0│24.2│24.4│24.5│24.7│24.9│25.1│25.3│25. │25.7 │25.9 │26.1│29.3 │26.5 │
├─────┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
│ 26 │24.2│24.4│24.5│24.7│24.9│25.0│25.2│25.4│25.6│25.8│26.0│26.2│26.4 │26.6 │26.8 │27.0 │
├─────┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
│ 26.5 │24.6│24.8│24.9│25.1│25.3│25.4│25.6│25.8│26.0│26.3│26.5│26.7│26.9│27.1│27.3│27.5│
├─────┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
│ 27 │25.1│25.3│25.4│25.6│25.7│25.9│26.1│26.3│26.5│26.8│27.0│27.2│27.5│27.7│27.9│28.1│
├─────┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
│ 27.5 │25.5│25.7│25.8│26.1│26.1│26.3│26.6│26.8│27.0│27.3│27.5│27.7│28.0│28.2│28.4│28.6│
├─────┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
│ 28 │26.0│26.1│26.3│26.5│26.6│26.8│27.0│27.3│27.5│27.8│28.0│28.2│28.5│28.7│29.0│29.2│
├─────┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
│ 28.5 │26.4│26.6│26.8│27.0│27.1│27.3│27.5│27.8│28.0│28.3│28.5│28.7│29.0│29.2│29.5│29.7│
├─────┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
│ 29 │26.9│27.1│27.3│27.5│27.6│27.8│28.0│28.3│28.5│28.8│29.0│29.2│29.5│29.7│30.0│30.2│
├─────┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
│ 29.5 │27.4│27.6│27.8│28.0│28.1│28.3│28.5│28.8│29.0│29.3│29.5│29.7│30.0│30.2│30.5│30.7│
├─────┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
│ 30 │27.9│28.1│28.3│28.5│28.6│28.8│29.0│29.3│29.5│29.8│30.0│30.2│30.5 │30.7 │31.0 │31.2 │
├─────┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
│ 30.5 │28.3│28.5│28.7│28.9│29.1│29.3│29.5│29.8│30.0│30.3│30.5│30.7│31.0│31.2│31.5│31.7│
├─────┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
│ 31 │28.8│29.0│29.2│29.4│29.6│29.8│30.1│30.3│30.5│30.8│31.0│31.2│31.5│31.7│32.0│32.2 │
├─────┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
│ 31.5 │29.3│29.5│29.7│29.9│30.1│30.2│30.5│30.7│31.0│31.3│31.5│31.7│32.0 │32.2 │32.5 │32.7 │
├─────┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
│ 32 │29.8│30.0│30.2│30.4│30.6│30.7│31.0│31.2│31.5│31.8│32.0│32.3│32.5│32.3 │33.0 │33.3 │
├─────┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
│ 32.5 │30.2│30.4│30.6│30.8│31.1│31.3│31.5│31.7│32.0│32.3│32.5│32.8│33.0 │33.3 │33.5 │33.7 │
├─────┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
│ 33 │30.7│30.8│31.1│31.3│31.5│31.7│32.0│32.2│32.5│32.8│33.0│33.3│33.5│33.8 │34.1 │34.3 │
├─────┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
│ 33.5 │31.2│31.3│31.6│31.8│32.0│32.2│32.5│32.7│33.0│33.3│33.5│33.8│33.9│34.3 │34.6 │34.7 │
└─────┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┘
续表2
┌─────┬───────────────────────────────────────────────┐
│乳绸计读数│ 牛乳温度，℃ │
│ ├──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┤
│ │10 │11 │12 │13 │14 │15 │16 │17 │18 │19 │20 │21 │22 │23 │24 │25 │
│ ├──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┤
│ │ 换算为20℃时牛乳乳稠计度数 │
├─────┼──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┬──┤
│ 34 │31.7│31.9│32.1│32.3│32.5│32.7│33.0│33.2│33.5│33.8│34.0│34.3 │34.4│34.8│35.1│35.3│
├─────┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
│ 34.5 │32.1│32.3│32.6│32.8│33.0│33.2│33.5│33.7│34.0│34.2│34.5│34.7│35.0│35.3│35.6│35.7│
├─────┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
│ 35 │32.6│32.8│33.1│33.3│33.5│33.7│34.0│34.2│34.5│34.7│35.0│35.3│35.5│35.8│36.1│36.3 │
├─────┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
│ 35.5 │33.0│33.3│33.5│33.8│34.0│34.2│34.4│34.7│35.0│35.2│35.5│35.7│36.0│36.2│36.5│36.7│
├─────┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
│ 36 │33.5│33.8│34.0│34.3│34.5│34.7│34.9│35.2│35.6│35.7│36.0│36.2│36.5│36.7│37.0│37.3│
└─────┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┴──┘
2.3 乳脂肪的测定
2.3.1 罗兹哥特里法
2.3.1.1 仪器: 罗兹哥特里抽脂瓶(见附图1)。 图1罗兹哥特里抽脂瓶 1-玻塞(硬质玻璃);2-磨沙活塞(硬质玻璃)
2.3.1.2 试剂: 同GB 5413-85《乳粉检验方法》2.4.1.2项。
2.3.1.3 方法: 称取牛乳10ml(准确至0.2mg)于抽脂瓶中,以下操作同GB 5413&;#141;&;#352;-85 2.4.1.3项。
2.3.2 盖勃法
2.3.2.1 仪器: 除另准备11ml牛乳吸管(见图2)外,其他同GB 5413-85 2.4.2.1&;#141;&;#352;.1内容规定。 图2 11ml牛乳吸管
2.3.2.2 试剂：同GB 5413-852.4.2.1.2内容规定。
2.3.2.3 方法：量取硫酸10ml，注入牛乳乳脂计内，颈口勿沾湿硫酸，用11ml吸取 牛乳样品至刻度，加入，同一牛乳乳脂计内，再加入异戊醇1ml，塞紧橡皮塞，充 分摇动，使牛乳凝块溶解。将乳脂计放入65～70℃的水浴中保温5min，转入或转出 橡皮塞使脂肪柱适合乳脂计刻度部分，然后置离心机中以离心因素等于350旋转5min， 再放入65～70℃的水浴中保温5min，取出立即读数，读数时要将乳脂肪柱下弯月面 放在与眼同一水平面上，以弯月面下限为准。所得数值即为脂肪的百分数。
2.3.3 巴布考克法
2.3.3.1 仪器：除另准备17.6ml牛乳吸管（见图3）外，其余同GB 5413-85 2.4.3.1项。 图3 17.6ml牛乳吸管 2.3.3.2 试剂：硫酸，比重1.820～1.8.25，分析纯。
2.3.3.3 方法：吸取20℃牛乳17.6ml，注入巴氏乳旨瓶中，加等量硫酸，小心倒入 乳脂瓶中，硫酸流入牛乳下面成一层，摇动也脂瓶使牛乳和硫酸混合，即成棕色， 继续摇动2～3min，将乳脂瓶放入离心机中，以离心因素等于350离心5min，取出 后向瓶中加入60℃热水至分离贩脂肪层在瓶颈部刻度处，再同样的转速旋转2min， 取出置60℃水浴中保温5min，取出，立即读数。读数方法同盖勃法。所得数值即为 脂肪的百分数。
2.4 全乳固体测定
2.4.1 减量法
2.4.1.1 仪器和试剂
2.4.1.1.1 带盖铝皿：直径50～70mm。
2.4.1.1.2 海砂。
2.4.1.2 方法 在带盖铝皿中，加入海砂10～20g，于98～100℃烘箱内烘至恒重。吸取5ml牛奶于 此铝皿中，置分析天平上称量（准确至0.2mg)，再置水浴上蒸干，擦去皿壁上的水 迹，放入98～100℃的干燥箱中干燥2h后，加盖取出，但不要盖紧，置于干燥器中 冷却后称重；再放入烘箱中干燥2h取出，冷却20～30min，将盖盖紧，称重。如此 重复至前后两次重量差不超过2mg为止。
2.4.1.3 计算 W2-W3×100 全乳固体(%)(3) W1-W3
式中：W1-含有海砂的皿加样品重，g；
W2-含有海砂的皿加样品干燥后重，g；
W3-含有海砂的皿重，g。 2.4.2 计算法 利用式(4)，可由上述所测得的比重和脂肪含量来计算全乳固体的含量。 T＝ 0.25L 1.2F 0.14 ……………………………… (4) 式中：T-全乳固体，%; F-脂肪，%; L-乳稠计(15℃/15℃)度数。 非脂乳固体(%)=T-F ……………………………………… (5) 式中符号同式(4)。 2.5 掺水或脱脂的检验与计算 对原乳有怀疑时，应采用“畜舍”乳样进行分析。在无法取得“畜舍”乳样时，亦 可从乳样所测出的成分计算与规定标准相差之百分率。但在判断掺水时，应以其他 方法，如乳清折射率测定或冰点测定来鉴定。 E-E1 加水百分率=－－－－×100 ……………………………………………… (6) E F-F1 加入脱脂乳百分数（或取出脂肪百分率）＝ －－－－ ×100 ………………… (7) F 加水和加脱脂乳的百分数： F1 A=－－－－－×100 ………………………………………………… (8) 100-F E1 加水百分数B=－－－－－×100 ……………………………………………… (9) 100- E 加脱脂乳百分数=A-B (10) 式中：E-“畜舍”乳样中或标准规定的非脂乳固体百分数； E1-被检验乳样中的非脂乳固体百分数； F-“畜舍”乳样中或标准规定的脂肪百分数； F1-被检验乳样中的脂肪百分数。 2.6 异常乳的检出 2.6.1 氯糖数的测定 2.6·1.1 乳糖的测定：参照GB 5413-852.83款。 2.6·1.2 氯化物的测定：用吸管吸取20ml牛乳，注入200ml容量瓶中，加入 10ml20%的硫酸铝溶液及8ml2N氢氧化钠溶液，混合均匀后过滤。取100ml滤液， 注入250ml三角瓶中，加入1ml10%的铬酸钾溶液，用0.02817N的硝酸银溶液（每升 水溶入4.788g硝酸银，需标定）滴定到红砖色(1ml0.02817N的硝酸银相当于1mg氯）。 注：滴定前，须用石蕊试纸测定溶液酸碱性。如果呈酸性，则须事先用氢氧化钠 溶液中和至中性。 V 氯（％）=－－－－－－－－×10 ……………………………………………… (11) 1.030×100 式中：V-滴定时用去硝酸银的毫升数； 1.030-正常牛乳的比重； V×10-每100ml牛乳中含氯量，mg。 X 氯糖数＝ －－－×100 …………………………………………………………… (12) L 式中：X-氯的百分含量，%； L-乳糖的百分含量，%。 健康牛乳中的氯糖数不超过4，患乳房炎的乳中氯糖数则增高。对病牛乳的检查， 在牛乳发生疑问时，进行个别牛只的牛乳检查有相当意义。 2.6.2 血与脓的检出 用小刀尖取少量的二氨基联苯，将其溶解在盛有2ml 96%的乙醇试管内，加入2ml3%的过氧化氢溶液，摇匀后再加入3～4滴冰乙酸。 在上述配制的试剂中，加入4～5ml牛乳，如有血与脓存在时，在20～30s后，液休呈深蓝色。 2.7 机械杂质的检出 对牛乳中杂质存在的程度有怀疑者，可取500ml或250ml牛乳进行杂质度的测定，测定方法可参阅GB 5413-85 2.7条中杂质度的测定，测定结果要换算成1L牛乳中所含&;#141;&;#352;杂质的毫克数。 2.8 碱性物质的检出 2.8.1 玫瑰红酸定性法 2.8.1.1 试剂：玫瑰红酸（0.05%乙醇溶液）。 2.8.1.2 方法：于盛有5ml牛乳的试管中加入5ml玫瑰红酸液，和手指堵住管口，摇匀，乳中如无碱性物质则呈黄色，有碱时则呈玫瑰红色，其加入量与颜色的深浅&;#141;&;#352;成正比（在检验时应做对照试验）。 2.8.2 牛乳灰分碱度测定法 在坩埚或瓷皿中，注入25ml牛乳，置于浴上蒸干，然后在电炉上灼烧成灰。灰分用 50ml热水分数次浸渍，并用玻璃棒捣碎灰块，过滤，滤纸及灰分残块用热水冲洗。 滤液中加入数滴酚酞指示剂，用0.1N盐酸标准进行滴。1ml 0.1N盐酸标准溶液相当 于0.0106g碳酸钠。牛乳中碳酸钠正常含量为0.025%。 V 碳酸钠加入量(%)=－－－－－－×0.0106×(100-0.025) ……………………… (13) 25×1.030 式中：V-消耗0.1N盐酸标准溶液的毫升数。 2.9 乳房炎的检出 2.9.1 试剂配制方法 称取60g碳酸钠(Na2CO3·10H2O,化学纯)溶于100ml蒸馏水中，称取40g无水氯化 钙溶于300ml蒸馏水中。二者须均匀搅拌、加温、过滤，然后将二种滤液倾注一 起，予以混合、搅拌、加温和过滤，于第二次滤液中加入等量的15%的氢氧化钠 溶液，&;#141;&;#352;继续搅拌、加温、过滤即为试液。加入溴甲酚紫于试液内，有助于结果 的观察。试&;#141;&;#352;剂宜放在棕色玻璃瓶中保存。 2.9.2 检验方法 吸取乳样3ml于白色平皿中，加0.5ml试液，立即回转混合，约10s后观察结果（见 表3）。 表3 ┌────────────────┬─────────┐ │ 现 象 │ 结 果 │ ├────────────────┼─────────┤ │ 无沉淀及 片 │ -(阴性) │ ├────────────────┼─────────┤ │ 稍有沉淀发生 │ (可凝) │ ├────────────────┼─────────┤ │ 肯定有沉淀(片条) │ (阳性) │ ├────────────────┼─────────┤ │ 发生粘稠性团块并继之分为薄片 │ (强阳性) │ ├────────────────┼─────────┤ │ 有持续性的粘稠性团块(凝胶) │ (强阳性) │ └────────────────┴─────────┘ 2.10 蔗糖的检出方法 2.10.1 方法一 2.10.1.1 试剂 2.10.1.1.1 乙酸铅-氨水溶液:将250g乙酸铅溶于600ml水中，再加入250ml15%的 氨水（比重为0.944）。 2.10.1.1.2 二苯胺试剂：10ml 10%的二苯胺－乙醇溶液、25ml冰乙酸和65ml浓盐 酸混合即成。 2.10.1.1.3 费林试液：甲液和乙液的配制同GB 5413-85 2.8.1.3款。 2.10.1.2 检验方法 取30ml牛乳，在水浴上加热到80～90℃，加入30ml乙酸铅氨水溶液，用力摇动 0.5min，过滤。取无色透明滤液3ml，加入等容积的二苯胺试剂，摇匀，并在沸水 浴上保持10min，如有蔗糖存在时，1～2min内就有淡蓝色出现，5min后变为深蓝 色。当在水浴内保持时间超过10min时，痕迹量的乳糖存在也可能出现淡蓝色。 为了对照，可取4ml滤液，加入等容积的费林试液（甲液、乙液各2ml)置于沸水 浴内加热，如果二苯胺的反应明显，而没有还原费林试液时，则证明有蔗糖存在。 此法可测出0.1～1.0%的蔗糖。 2.10.2 方法二 取30ml牛乳，加入2ml浓盐酸混合，过滤。取滤液15ml，加入1g间苯二酚，置于沸 水浴中5min，有蔗糖存在时，即有红色出现。 2.11 淀粉的检出 取5ml牛乳，加入试管中，稍稍煮沸，待冷却后，加入数滴碘液（碘的酒精溶液 或0.1N的碘液），有淀粉存在时，则有蓝色或青蓝色沉淀物出现。 2.12 熟乳的检出 牛乳中有一种酶，能分解过氧化氢而与色素起作用，加热后酶即被破坏。 2.12.1 试剂 2.12.1.1 1.0%的过氧化氢溶液。 2.12.1.2 2.0%的对苯二胺。 2.12.2 方法 取5ml牛乳，放入试管中，加0.2ml 1%的过氧化氢，摇匀，再加入0.2ml 2%的对苯 二胺，摇匀。生乳或加热至78℃以下者呈青蓝色，加热至79～80℃者，0.5min后呈 淡灰青色，加热至80℃以上者无颜色出现。 2.13 生鲜牛乳中抗生素残留检验 牧场内经常应用抗生素治疗乳牛的各种疾病，特别是乳牛和乳房炎，有时抗生素直 接注射乳房部位进行治疗，因此凡经抗生素治疗的 乳牛，其乳中在一定时期内仍 残存着抗生素。对抗生素有过敏体质的人服用后就会发生过敏反应，也会使某些菌 株对抗生素产生抗药性。因此，检查乳中有无抗生素残留已成为一项急需开展的常 规检验工作。TTC（氯化三苯四氮唑）试验是用来测定乳中有无抗生素残留的较简 易方法，现介绍于下。 2.13.1 设备和材料 2.13.1.1 水浴箱：一个。 2.13.1.2 温箱：一个。 2.13.1.3 锅：一个。 2.13.1.4 100℃温度计：一支。 2.13.1.5 蜡笔：一支。 2.13.1.6 试管架：一个。 2.13.1.7 灭菌10ml吸管：每一份检样需二支。 2.13.1.8 灭菌1ml吸管：每份检样需二支。 2.13.1.9 灭菌15×150mm试管：每份检样需二支。 2.13.2 培养基和试剂 2.13.2.1 菌种：嗜热乳酸链球菌。 2.13.2.2 脱脂乳：经113℃20min灭菌。 2.13.2.3 4%氧化三苯四氮唑水溶液：装褐色瓶内于7℃冰箱保存，临时1:5稀释。 2.13.3 检验程序 鲜乳中抗生素残留检验程序如下。 ┌─────┐
│ 检样 │
└──┬──┘
┌─────┴────┐
│ 80℃，加热5MIN │
└─────┬────┘
┌─────┴────┐
│ 冷却37℃，以下 │
└─────┬────┘
┌─────┴────┐
│加菌液，36±1℃水浴│
└─────┬────┘
┌───────┴───────┐
│加TTC指示剂,36±1℃水浴30MIN├──────┐
└────┬──────────┘ │
┌──┴──┐ ┌────┴────┐
│不显色 │ │ 红色 │
└──┬──┘ └──────┬──┘
┌────────┐┌──┴─────┐┌─────────┐┌─┴───┐
│显色者抗生素阴性├┤36±1℃水浴30MIN├┤显色者抗生素阳性││抗生素阴性│
└───────┬┘└────────┘└┬────────┘└──┬──┘
│ ┌─────┐ │ ┌──┴──┐
└─┤报告 ├────┘ │ 报告 │
└─────┘ └─────┘
2.13.4.3 叛断方法 准确培养30min，观察结果，如为阳性，再继续培养30min做第二次观察。在观察时 要迅速，避免光照过久干扰，乳中有抗生素存在向检样中加入菌液培养时细菌不增 殖，此时由于加入的指示剂TTC不还原，所以不显色。与此相反，如果没有抗生素 存在，则加入菌液即进行增殖，TTC被还原而湿红色，也就是说检样呈乳的原色时 为阳性，成红色为阴性。 表4 显色状态标准判断 ┌──────────┬────────┐ │ 显色状态 │ 判断 │ ├──────────┼────────┤ │ 未显色者 │ 阳性 │ ├──────────┼────────┤ │ 微红色者 │ 可凝 │ ├──────────┼────────┤ │ 桃红色红色 │ 阴性 │ └──────────┴────────┘ 表5 检测各种抗生素的灵敏度 ┌─────────┬────────┐ │ 抗生素名称 │ 最低检出量 │ ├─────────┼────────┤ │ 青霉素 │ 0.004单位 │ ├─────────┼────────┤ │ 链霉素 │ 0.5单位 │ ├─────────┼────────┤ │ 庆大霉素 │ 0.4单位 │ ├─────────┼────────┤ │ 卡那霉素 │ 5单位 │ └─────────┴────────┘ 2.14 细菌总数及大肠菌群检验 按GB 5408-85《消毒牛乳》附录Ｂ（补充件）执行。 2.15 六六六、滴滴涕检验 按GB 5413-85中2.11条进行。 2.16 汞的检验 GB 5413-85中2.10条进行。 附录A 牛乳新鲜度的检验方法 (参考件) A.1 利色唑林（刃天青）试验 A.1.1 仪器 A.1.1.1 20ml带塞刻度试管。 A.1.1.2 水浴锅。 A.1.1.3 1ml吸管。 A.1.2 试剂 A.1.2.1 刃天青基础液：取100mg刃天青（分析纯）于烧杯中，加少量煮沸过的不水 溶解，入200ml容量瓶中，最后加水至刻度，贮藏在冰箱中，此液含刃天青0.05%。 A.1.2.2 刃天青工作液：用煮沸过的、经玻璃皿蒸馏的水以1:10的比例将基础液稀 释即可，工作液贮于棕色瓶中，避光保存。 A.1.3 方法 向刻度试管中加入牛乳10ml，加刃天青工作液1ml，混匀，用灭菌橡胶塞塞好，但 不要塞严，在38～40℃的水浴中放置5min。当试管加热到57℃时，用胶塞把管口塞 住，慢慢转动试管（不振荡），使受热均匀，用温度计测被检样液温度（可将温度 计放在对照组试管中测得），样液温度在57℃下维持60min。 根据20min和60min的观察结果按表A1分级。 表A1 ┌───┬──────────────────────────────────┐ │ │ 乳 的 颜 色 │ ├───┼─────────┬───────────┬────────────┤ │级别 │乳的质量 │ 经过20min │ 经过60min │ ├───┼─────────┼───────────┼────────────┤ │ 1 │良好 │ 青蓝色
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